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抑菌环试验_0

发布时间:2018-06-24 23:05:26 来源:欧贝特检测设备 浏览:

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抑菌环试验 1 目 的测定抗(抑)菌产品对细菌和真菌的抗(抑)菌作用。2 原 理利用抑菌剂不断溶解经琼脂分散构成不同浓度梯度,以显示其抑菌作用。实验通过抑菌环大小以判断其是不是具有抑菌能力。本实验适用于抑菌剂与溶出性抗(抑)菌产品的抗(抑)菌效果鉴定。 3 实验材料及器材(1)实验菌株 金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)、大肠杆菌(8099 或ATCC 11229)、白色念珠菌(ATCC 10231)菌悬液及根据抑菌剂特定用处所用的其他菌悬液(2)抑菌剂载体 5mm 直径圆形新华1号定性滤纸片,经压力蒸汽灭菌处理后,置 120℃ 烤干2h,保存备用(3)活菌培养计数所需器材 (4)微量移液器 5&m

1 目 的

测定抗(抑)菌产品对细菌和真菌的抗(抑)菌作用。

2 原 理
利用抑菌剂不断溶解经琼脂分散构成不同浓度梯度,以显示其抑菌作用。实验通过抑菌环大小以判断其是不是具有抑菌能力。本实验适用于抑菌剂与溶出性抗(抑)菌产品的抗(抑)菌效果鉴定。

3 实验材料及器材

(1)实验菌株 金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)、大肠杆菌(8099 或ATCC 11229)、白色念珠菌(ATCC 10231)菌悬液及根据抑菌剂特定用处所用的其他菌悬液

(2)抑菌剂载体 5mm 直径圆形新华1号定性滤纸片,经压力蒸汽灭菌处理后,置 120℃ 烤干2h,保存备用

(3)活菌培养计数所需器材

(4)微量移液器 5μL~50μL,可调式

(5)游标卡尺

(6)营养琼脂培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基与沙堡琼脂培养基

4 操作程序

(1)抑菌片的制备:对液体抑菌剂,取无菌并干燥的滤纸片。每片滴加实际使用浓度抑菌剂溶液 5μL,然后将滤纸片平放于清洁的无菌平皿内,开盖置恒温培养箱(37℃)中烤干,或置室温下自然干燥后备用。溶出性抗(抑)菌产品,可直接制成直径为 5mm,厚不超过 4mm 圆片(块),每 4 片(块) 1组。

(2)阴性对比样片的制备:取无菌干燥滤纸片,每片滴加无菌蒸馏水5μL,干燥后备用。 溶出性抗(抑)菌产品的阴性对比样本, 应取同种材质不含抑菌成分的样品,制成与实验组大小相同的样片(块)。

(3)实验菌的接种:用无菌棉拭子蘸取浓度为 5×105cfu/mL~5×106cfu/mL 实验菌悬液,在适合的培养基平板表面均匀涂抹3次。每涂抹1次,平板应转动 60°,最后将棉拭子绕平板边沿涂抹1周。盖好平皿,置室温干燥 5min。

(4)抑菌剂样片贴放:每次实验贴放1个染菌平板,每一个平板贴放4片实验样片, 1 片阴性对比样片,共 5 片。用无菌镊子取样片贴放于平板表面。各样片中心之间相距 25mm 以上, 与平板的周缘相距 15mm 以上。贴放好后,用无菌镊子轻压样片,使其紧贴于平板表面。盖好平皿,置 37℃恒温培养箱,培养 16h~18h 视察结果。用游标卡尺丈量抑菌环的直径(包括贴片)并记录。

(5)实验重复3次。

(6)丈量抑菌环时,应选均匀而完全无菌生长的抑菌环进行。丈量其直径应以抑菌环外沿为界。 4

5评价规定

(1)抑菌作用的判断:
抑菌环直径大于 7mm 者,判为有抑菌作用。 抑菌环直径小于或等于 7mm 者,判为无抑菌作用。

(2)3 次重复实验(共12个样片)均有抑菌作用结果者,判为合格。

(3)阴性对比组应无抑菌环产生。否则实验无效。

6 注意事项
(1)每次实验均应设置阴性对比。在报告中亦必须将对比组的结果列出。
(2)接种用细菌悬液的浓度应符合要求。浓度太低,接种菌量少,抑菌环常因之增大;浓度太高,接种量过量,抑菌环则可减小。
(3)应保持琼脂浓度的准确性,否则可影响抑菌环的大小。
(4)培养时间不得超过 18h。培养太久,部份细菌可恢复生长,抑菌环变小。
(5)抑菌环直径可受抑菌剂的量、抑菌性能和干湿度影响。故抑菌剂滤纸片应在实验当天制备。






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